小鼠神經星形膠質細胞是神經膠質形成的主要功能細胞,膠質細胞是在大腦從早期發育到成熟的轉變過程中產生的。當程序性細胞死亡,或大腦發育過程中,中樞神經系統受損或病理性損傷時,膠質細胞可作為大腦中的巨噬細胞。當II類組織相容性復合物表達CD-4陽性T細胞時,膠質細胞可以表達抗原,可以進行FC介導的巨噬細胞,并與造血細胞和巨噬細胞共享抗原。小鼠星形膠質細胞來源于正常小鼠腦組織,經胰蛋白酶消化制備。優化靶細胞的生長條件,從而減少對雜細胞(如脂肪細胞、成纖維細胞等)的污染,保證質量的穩定性。經過10代仍能保持原代細胞的分化狀態,可用于體外藥物模型和系統評價。
1、首先觀察小鼠神經星形膠質細胞培養瓶是否完好,培養基是否有滲漏、混濁現象。
2、用75%酒精擦拭細胞培養瓶表面,顯微鏡下觀察細胞狀態。由于運輸問題,會有少量貼壁細胞從瓶壁脫落;先不要打開培養瓶的瓶蓋,將細胞放入細胞培養箱中培養2-4小時,以穩定細胞狀態。
3、仔細閱讀細胞說明書,了解細胞的相關信息,如粘附特性(粘附/懸浮)、細胞形態、使用的基礎培養基、血清比例、所需細胞因子、傳代率、換液頻率等。
4、靜置后,取出細胞培養瓶,記錄細胞狀態;建議細胞繼代培養后定期拍照記錄細胞生長狀況。
5、貼壁細胞:如果細胞生長密度超過80%,可以正常傳代;如果不超過80%,則將細胞培養瓶中的培養基取出,留5ml左右繼續培養,直至細胞密度達到80%左右,然后進行繼代培養操作,瓶蓋可以稍微松開。
6、細胞懸浮:將小鼠神經星形膠質細胞培養瓶中的液體全部轉移到50ml無菌離心管中,1200rpm離心5min。離心后,收集上清培養基備用。加入5ml培養基吹干并重懸管底的細胞沉淀。鏡檢時,若細胞密度超過80%,可將細胞懸液分裝于兩個細胞培養瓶中培養,加入培養基至5ml;如果細胞密度不超過80%,將細胞懸液移至原瓶中繼續培養,直至細胞密度達到80%左右。