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幾種常見的細胞污染類型及處理方法

凡混入細胞培養環境中對細胞生存有害的成分和造成細胞不純的異物都應視為細胞污染，細胞污染不能*被消除，但能減少其發生的頻率和后果的嚴重性。本文將簡要介紹幾種常見的細胞污染類型及處理方法。常見細胞污染類型細胞細菌污染特征：大小在0.5~5μm，比動物細胞小很多。多呈球狀或桿狀，形態規則，分布均勻；增殖速度快，一般細菌污染后48~72小時爆發式增殖；營養消耗快，培養基很快變黃，變渾濁；鏡下觀察有明顯的定向運動。處理方法：輕度細菌污染可用10X雙抗清洗處理，重度細菌污染建議消殺后丟棄...

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細胞凍存與復蘇的技術原理和操作步驟

細胞凍存與細胞復蘇，是細胞培養過程中的常見工作。細胞凍存，是指將細胞貯存在超低溫環境中，使細胞暫時“冬眠”的技術，在需要的時候再進行復蘇。細胞復蘇，是把凍存在-80℃冰箱或液氮中的細胞快速解凍，并使細胞重新恢復生長的技術。本文將為大家介紹細胞凍存與復蘇的技術要點和操作步驟。細胞凍存篇凍存原則細胞凍存原則為“慢凍”，即讓細胞在緩慢降溫的條件下逐漸冷凍。如果直接將細胞懸液放在超低溫下快速冷凍，細胞會受到冷凍損傷而死亡。在凍存液中添加的保護劑（如DMSO、甘油）和在凍存盒中添加的異...

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細胞長得慢、傳代不易貼壁，該怎么挽救？

各類細胞產品是我們做實驗研究的基礎，一支小小的細胞，關乎我們各種實驗的成功與否，細胞的”小事情“，在實驗中都是”大事情“，如果你的細胞出現生長緩慢、不貼壁等情況，那你可要注意了，這就是細胞狀態不好的信號，要及時“挽救”，不然很有可能細胞就瀕臨死亡。問題一：細胞生長緩慢細胞長得慢是細胞培養過程中比較常見的問題，一般來說，細胞活力和濃度一直是細胞健康的標志，細胞長得慢的話，活力和濃度可能都會直線下降。造成細胞生長緩慢的主要原因及解決方法：1，新配置的培養基以及換了新的血清，細胞不...

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Annexin V流式檢測細胞凋亡的數據分析方法

示例：細胞用FITC-AnnexinV/PI熒光雙染細胞凋亡檢測試劑盒檢測效果圖。Jurkat細胞用1μM喜樹堿(Camptothecin)(左)或未加藥(右)處理4h，FITC-AnnexinV/PI熒光雙染細胞凋亡檢測試劑盒染色后，流式細胞儀熒光檢測。AnnexinV-FITC單陽性細胞為早期凋亡細胞，AnnexinV-FITC和PI染色雙陽性的細胞為壞死細胞或者晚期凋亡。PI單染色陽性位裸核細胞。實測數據可能會因細胞類型、細胞凋亡情況，檢測儀器等的不同而存在差異，圖中數...

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細胞傳代時間經驗技巧

養細胞的小伙伴們都知道，細胞一定要傳代，因為細胞在培養過程中不斷的繁殖，數量也隨之增加，然而培養皿/培養瓶的空間有限，增殖受到抑制，所以必須將一部分細胞移至別的培養皿/培養瓶，讓細胞有足夠生長空間。細胞傳代也不僅僅是為細胞安一個更大的“家”，更重要的，是使細胞系或細胞株進一步增殖，這樣，我們才能有足夠的細胞做各種各樣的實驗。但是，對于傳代的時間，很多小伙伴都掌握不好，因為對于不同的細胞來說，判斷能否開始傳代的標準略有不同，今天，我們就主要來聊一下，細胞傳代的時間問題。什么時候...

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如何避免胎牛血清沉淀物的產生

胎牛血清中可能出現的沉淀物是什么？①纖維蛋白，它是經常出現的較大的沉淀物，可以達到1-2mm，可以用肉眼觀察到。②磷酸鈣，它也是常見的一種沉淀物，通常會使血清出現渾濁，并且在37℃培養的時候會增加。這種沉淀物在倒置顯微鏡下觀察像小黑點，這些小黑點由于布朗運動看上去可以活動，因此經常被誤認為是微生物污染。③膽固醇、脂肪酸酯以及一些蛋白質，它們也是血清中出現沉淀物的常見原因。關于細胞生長，我們的試驗以及經驗表明沉淀物不會影響細胞培養，我們的客戶以及其它血清生產商也證明了這一點。那...

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細胞的凍存與復蘇

一、程序凍存步驟（需梯度降溫）1、配置凍存液，凍存液推薦配比：55%（基礎培養基）+40%(血清)+5%（DMSO）或90%胎牛血清+10%DMSO；推薦使用Procell通用血清型程序凍存液，貨號PB180436；2、制備好的細胞懸液計數，計算總細胞量；3、細胞離心后盡量吸干凈上清，離心轉速1200rpm（250g）3min；4、加入配置好的凍存液重懸，調整細胞濃度為3×106~1×107cells/mL；5、分裝入凍存管，一個凍存管分裝1~1.5毫升；6、推薦使用程序降溫...

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原代細胞的取材和分離方法

將動物機體的各種組織從機體中取出，經各種酶(常用胰蛋白酶)、螯合劑(常用EDTA)或機械方法處理，分散成單細胞，置合適的培養基中培養，使細胞得以生存、生長和繁殖，這一過程稱原代培養。原代細胞培養的步驟一般是：取材→分離→培養和維持，今天我們重點介紹原代細胞的取材和分離方法。一、取材人和動物細胞的取材是原代細胞培養成功的首要條件，直接影響細胞的體外培養。取材的基本要求：①取材要注意新鮮和保鮮②應嚴格無菌③防止機械損傷④去除無用組織和避免干燥⑤應注意組織類型、分化程度、年齡等⑥作...

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